(Проточка цитометрија, ФЦМ) је анализатор ћелија који мери интензитет флуоресценције обојених маркера. То је високотехнолошка технологија развијена на основу анализе и сортирања појединачних ћелија. Може брзо да мери и класификује величину, унутрашњу структуру, ДНК, РНА, протеине, антигене и друга физичка или хемијска својства ћелија и може се заснивати на прикупљању ових класификација.
Цитометар протока углавном се састоји од следећих пет делова:
1 систем комора за проток и систем флуиди
2 ласерског извора светлости и систем обликовања снопа
3 оптички систем
4 Електроника, Складиште, дисплеј и систем анализе
5 Систем за сортирање ћелија
Међу њима, ласерско узбуђење у ласерском извору светлости и систему формирања греде главно је мерење флуоресцентних сигнала у проточној цитометрији. Интензитет светлости за узбуђење и време излагања су повезани са интензитетом флуоресцентне сигнала. Ласер је кохерентан извор светлости који може да обезбеди појединачну дужину, високо интензитет и осветљење високе стабилности. То је идеалан извор светлости за узбуђење у погледу испуњавања ових захтева.
Постоје два цилиндрична сочива између ласерског извора и комора за проток. Ова сочива фокусирају ласерски сноп са кружним пресек измјеђеним из ласерских извора у елиптичну греду са мањим пресеком (22 ум × 66 μм). Ласерска енергија унутар овог елиптичног снопа дистрибуира се према нормалној дистрибуцији, осигуравајући доследан интензитет осветљења ћелија које пролазе кроз подручје за откривање ласера. С друге стране, оптички систем се састоји од више скупова сочива, приколица и филтера, који се могу отприлике поделити у две групе: узводно и низводно од коморе протока.
Оптички систем испред коморе протока састоји се од сочива и рупа. Главна функција објектива и имена (обично два сочива и имена) је фокусирање ласерског снопа са кружним пресеком које је ласерски извор емитује у елиптичном снопу са мањим пресеком. Ово дистрибуира ласерску енергију у складу са нормалном дистрибуцијом, обезбеђујући доследан интензитет осветљења ћелијама преко подручја за откривање ласера и минимизирање сметњи са луталицама.
Постоје три главне врсте филтера:
1: Дуги фолтер филтер (ЛПФ) - само омогућава светло са таласним дужинама веће од одређене вредности која ће проћи.
2: Кратки филтер (СПФ) - само омогућава светло са таласним дужинама испод одређене вредности која ће проћи.
3: Бандпасс Филтер (БПФ) - само омогућава светло у специфичној таласној дужини да прође.
Различите комбинације филтера могу усмјерити флуоресцентне сигнале на различитим таласним дужинама на појединачне фотомалтиплијерене цеви (ПМТС). На пример, филтери за откривање зелене флуоресценце (ФИТЦ) испред ПМТ-а су ЛПФ550 и БПФ525. Филтери који се користе за откривање наранџасто-црвене флуоресценције (ПЕ) испред ПМТ-а су ЛПФ600 и БПФ575. Филтери за откривање црвене флуоресценце (ЦИ5) испред ПМТ-а су ЛПФ650 и БПФ675.
Цитометрија протока се углавном користи за сортирање ћелија. Унапређењем рачунарске технологије, развој имунологије и проналазак моноклонских технологија антитела, његове примене у биологији, медицини, фармације и осталих области постају све распрострањенији. Ове апликације укључују анализу ћелије динамике, ћелијски апоптозу, куцање ћелије, дијагнозу тумора, анализу ефикасности лијекове итд.
Вријеме поште: сеп-21-2023
