(Проточна цитометрија, ФЦМ) је ћелијски анализатор који мери интензитет флуоресценције обојених ћелијских маркера. То је високотехнолошка технологија развијена на основу анализе и сортирања појединачних ћелија. Може брзо да измери и класификује величину, унутрашњу структуру, ДНК, РНК, протеине, антигене и друга физичка или хемијска својства ћелија, и може се заснивати на прикупљању ових класификација.
Проточни цитометар се углавном састоји од следећих пет делова:
1 Проточна комора и флуидички систем
2 Ласерски извор светлости и систем за обликовање зрака
3 Оптички систем
4 Електроника, систем за складиштење, приказ и анализу
5 Систем за сортирање ћелија
Међу њима, ласерско побуђивање у ласерском извору светлости и систему за формирање снопа је главно мерење сигнала флуоресценције у проточној цитометрији. Интензитет ексцитационог светла и време експозиције су повезани са интензитетом флуоресцентног сигнала. Ласер је кохерентни извор светлости који може да обезбеди једноталасну дужину, високог интензитета и високо стабилно осветљење. То је идеалан извор побудног светла за испуњавање ових захтева.
Између ласерског извора и проточне коморе налазе се два цилиндрична сочива. Ова сочива фокусирају ласерски зрак кружног попречног пресека који се емитује из ласерског извора у елиптични сноп мањег пресека (22 μм × 66 μм). Ласерска енергија унутар овог елиптичног снопа се дистрибуира у складу са нормалном дистрибуцијом, обезбеђујући конзистентан интензитет осветљења за ћелије које пролазе кроз подручје ласерске детекције. С друге стране, оптички систем се састоји од више сетова сочива, рупица и филтера, који се могу грубо поделити у две групе: узводно и низводно од проточне коморе.
Оптички систем испред проточне коморе састоји се од сочива и отвора. Главна функција сочива и отвора (обично два сочива и рупица) је фокусирање ласерског зрака кружног попречног пресека који емитује ласерски извор у елиптични сноп мањег попречног пресека. Ово дистрибуира енергију ласера у складу са нормалном дистрибуцијом, обезбеђујући конзистентан интензитет осветљења за ћелије у области детекције ласера и минимизирајући сметње од лутања светлости.
Постоје три главне врсте филтера:
1: Филтер дугог пролаза (ЛПФ) – пропушта само светлост са таласним дужинама већим од одређене вредности.
2: Схорт-пасс филтер (СПФ) – пропушта само светлост са таласним дужинама испод одређене вредности.
3: Појасни филтер (БПФ) - дозвољава само пролазак светлости у одређеном опсегу таласних дужина.
Различите комбинације филтера могу усмерити флуоресцентне сигнале на различитим таласним дужинама ка појединачним фотомултипликаторима (ПМТ). На пример, филтери за детекцију зелене флуоресценције (ФИТЦ) испред ПМТ-а су ЛПФ550 и БПФ525. Филтери који се користе за детекцију наранџасто-црвене флуоресценције (ПЕ) испред ПМТ-а су ЛПФ600 и БПФ575. Филтери за детекцију црвене флуоресценције (ЦИ5) испред ПМТ-а су ЛПФ650 и БПФ675.
Проточна цитометрија се углавном користи за сортирање ћелија. Са напретком компјутерске технологије, развојем имунологије и проналаском технологије моноклонских антитела, њена примена у биологији, медицини, фармацији и другим областима постаје све распрострањенија. Ове апликације укључују анализу динамике ћелија, ћелијску апоптозу, типизацију ћелија, дијагнозу тумора, анализу ефикасности лекова итд.
Време поста: 21.09.2023
