(Проточна цитометрија, FCM) је анализатор ћелија који мери интензитет флуоресценције обојених ћелијских маркера. То је високотехнолошка технологија развијена на основу анализе и сортирања појединачних ћелија. Може брзо да измери и класификује величину, унутрашњу структуру, ДНК, РНК, протеине, антигене и друга физичка или хемијска својства ћелија, и може се заснивати на прикупљању ових класификација.
Проточни цитометар се углавном састоји од следећих пет делова:
1 Проточна комора и флуидни систем
2 Извор ласерске светлости и систем за обликовање снопа
3 Оптички систем
4 Електроника, систем за складиштење, приказивање и анализу
5 Систем за сортирање ћелија
Међу њима, ласерска ексцитација у извору ласерске светлости и систему за формирање снопа је главно мерење флуоресцентних сигнала у проточној цитометрији. Интензитет ексцитационе светлости и време експозиције су повезани са интензитетом флуоресцентног сигнала. Ласер је кохерентни извор светлости који може да обезбеди осветљење једне таласне дужине, високог интензитета и високе стабилности. То је идеалан извор ексцитационе светлости који испуњава ове захтеве.
Између ласерског извора и проточне коморе налазе се два цилиндрична сочива. Ова сочива фокусирају ласерски сноп кружног попречног пресека који емитује ласерски извор у елиптични сноп мањег попречног пресека (22 μm × 66 μm). Ласерска енергија унутар овог елиптичног снопа се распоређује према нормалној расподели, обезбеђујући конзистентан интензитет осветљења ћелија које пролазе кроз подручје детекције ласера. С друге стране, оптички систем се састоји од више комплета сочива, рупица и филтера, који се могу грубо поделити у две групе: узводно и низводно од проточне коморе.
Оптички систем испред коморе за проток састоји се од сочива и отвора за иглу. Главна функција сочива и отвора за иглу (обично два сочива и један отвор за иглу) је да фокусирају ласерски сноп кружног попречног пресека који емитује ласерски извор у елиптични сноп мањег попречног пресека. Ово распоређује ласерску енергију према нормалној расподели, обезбеђујући конзистентан интензитет осветљења ћелија у подручју детекције ласера и минимизирајући сметње од расејане светлости.
Постоје три главне врсте филтера:
1: Филтер дугог пропусног опсега (LPF) - пропушта само светлост са таласним дужинама већим од одређене вредности.
2: Краткопропусни филтер (SPF) - пропушта само светлост са таласним дужинама испод одређене вредности.
3: Филтер пропусног опсега (BPF) - пропушта само светлост у одређеном опсегу таласних дужина.
Различите комбинације филтера могу усмерити флуоресцентне сигнале на различитим таласним дужинама ка појединачним фотомултипликаторским цевима (ФМТ). На пример, филтери за детекцију зелене флуоресценције (ФИТЦ) испред ФМТ-а су ЛПФ550 и БПФ525. Филтери који се користе за детекцију наранџасто-црвене флуоресценције (ПЕ) испред ФМТ-а су ЛПФ600 и БПФ575. Филтери за детекцију црвене флуоресценције (ЦY5) испред ФМТ-а су ЛПФ650 и БПФ675.
Проточна цитометрија се углавном користи за сортирање ћелија. Са напретком рачунарске технологије, развојем имунологије и проналаском технологије моноклонских антитела, њена примена у биологији, медицини, фармацији и другим областима постаје све шира. Ове примене укључују анализу ћелијске динамике, апоптозу ћелија, типизацију ћелија, дијагнозу тумора, анализу ефикасности лекова итд.
Време објаве: 21. септембар 2023.
